氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)大分子的基礎(chǔ)物質(zhì)。氨基酸分析在生 物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、化工等領(lǐng)域有重要作用。目前高效液相色 譜法為分析氨基酸的重要方法;但是許多氨基酸無紫外吸收, 需要經(jīng)過衍生化之后才可以測定。常用的衍生化試劑有:水合 茚三酮、鄰苯二甲醛、異硫氰酸苯酯(PITC)、2,4- 二硝基氟 苯(DNFB)等。高 速 冷 凍 離 心 機(jī)(CL31R, 美 國 Thermo 公 司), 超 聲 波 清 洗 器(SK5200LHC,53KHz/35KHz,上海科導(dǎo)儀器有限公司),pH 計(jì)(PB-10,賽 多麗絲中國儀器公司),恒溫電熱水浴鍋(HH.SY11-NI2B, 北京市長風(fēng)儀器儀表公司),恒溫干燥箱(KXH 202-2A,上 海科析實(shí)驗(yàn)儀器廠),電子分析天平(感量:0.0001g,稱量: 110g,美國 OHAUS Corp 公司),4℃ /-20℃冰箱(BCD-216KDA, 海爾集團(tuán)),渦旋混合器(XW-80A,江蘇海門市其林貝爾儀 器制造有限公司)。
堿性氨基酸:His 在流動相 pH=5.0 至 pH=6.5 時,峰型相 差不大,保留時間基本一致;Ccp 在流動相 pH 為 6.5 時峰型較 好,分離度較好;Arg 在流動相 pH=6.0 至 pH=7.0 時,峰面積 積分相差不大,峰型較好,分離度較好,雖然在流動相 pH 為 5.5 時峰面積積分最大,但是在流動相 pH=5.0 時,Arg 測不到氨基 酸峰。酸性氨基酸:Asp 的最佳柱溫為 32℃;Gly 最佳柱溫為 40℃。中性氨基酸:Glu 的最佳柱溫為 30℃,GABA 最佳柱溫 為 32℃。堿性氨基酸:His 最佳柱溫為 35℃,Ccp 最佳柱溫為 32℃,Arg 最佳柱溫為 32℃。