1 實 驗
1. 1 儀器設備與試劑
夏枯草,哈爾濱信衡中藥材有限公司。
數顯恒溫水浴鍋,上海力辰邦西儀器科技有限公司; 數控
超聲波清洗器,上海科導超聲儀器有限公司; 循環水多用真空泵,邦西儀器科技( 上海) 有限公司; 紫外可見分光光度計,北
京普析通用儀器有限責任公司。
實驗所用試劑: 蘆丁標準品,上海源葉生物科技有限公
司; 亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純,無錫市亞泰
聯合化工有限公司。
1. 2 標準曲線的繪制及樣品總黃酮含量測定
精密量取蘆丁標準品 10 mg,用 65% 乙醇定容至 100 mL 容
量瓶中,搖勻,備用。分別精確吸取 0,1. 0,2. 0,4. 0,6. 0
和 8. 0 mL 蘆丁標準溶液,依次放入 1 至 6 號 25 mL 容量瓶中,
而后加入 0. 8 mL 5% NaNO2 溶液,搖勻后放置 6 min,加入
0. 8 mL 10% Al( NO3 ) 3 溶液,搖勻后放置 6 min,再加入 10 mL
4% NaOH 溶液,用 65% 乙醇定容至刻度,放置 15 min 后于
510 nm 處測定其吸光度。以蘆丁標準溶液的質量濃度( C) 為
橫坐標,吸光度( A) 為縱坐標,繪制標準曲線。回歸方程為:
A = 8. 343C+0. 0122,R = 0. 9999。
1.3 提取方法的確定
稱取夏枯草 2. 0 g,加入40 mL 65% 乙醇,室溫下浸漬 2 h, 過濾。共提取 2 次后,合并濾液,定容至 100 mL,備用。稱取夏枯草 2. 0 g,加入 40 mL 65% 乙醇,水浴回流 1. 5 h, 過濾。共提取 2 次后,合并濾液,定容至 100 mL,備用。稱取夏枯草 2. 0 g,加入 40 mL 65% 乙醇,超聲提取 40 min, 過濾。共提取 2 次后,合并濾液,定容至 100 mL,備用。提取率達到最高為 5. 83% ,乙醇體積分數繼續提高,夏枯 草總黃酮提取率反而開始逐漸下降。分析其原因可能因為乙醇 濃度過高會溶出較多的脂溶性雜質及親脂性強的成分,其與總 黃酮競爭乙醇溶劑,間接地減少了總黃酮的溶出量,使得提取 率下降。因此選取最優乙醇體積分數為 55% 。
2 結果與討論
在提取溶劑同為 65% 乙醇,料液比均為 1∶20 的前提下, 3 種提取方法醇浸漬提取法、醇溶劑回流提取法、超聲輔助醇提 取法對夏枯草總黃酮的提取率分別為 4. 22% 、5. 34% 、5. 96% 。 結果表明超聲輔助醇提取法對夏枯草總黃酮的提取率最高,因 此繼續對該提取方法進行單因素及正交實驗優化工藝條件。當乙醇體積分數在 35% ~ 55% 范圍內時,夏枯草總黃酮提 取率隨著乙醇體積分數的升高而增加,當乙醇體積分數為 55%時,提取率達到最高為 5. 83% ,乙醇體積分數繼續提高,夏枯 草總黃酮提取率反而開始逐漸下降。
3 結 論
綜合比較了醇浸漬提取法、醇溶劑回流提取法、超聲輔助醇提取法對夏枯草總黃酮提取率的影響,結果表明超聲 輔助醇提取法對夏枯草總黃酮的提取率最高,并通過單因素實 驗及正交實驗優選出該提取法的最佳工藝條件: 乙醇體積分數 為 65% 、提取時間為 20 min、料液比為 1∶20,在此條件下, 夏枯草總黃酮提取率為 7. 01% ,本研究為夏枯草總黃酮的提取 及開發利用提供了理論依據。
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