1 材料與試劑
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
ICR 小鼠,雄性,18.0~22.0 g,6月齡。購于長(zhǎng)春億斯實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(吉)-2015-0001。
1.2 材料
云芝材料采自吉林省延邊州汪清縣林區(qū),經(jīng)吉林 農(nóng)業(yè)大學(xué)宋慧教授鑒定為多孔菌科彩絨革蓋菌 (C.versicolor Quel)的干燥子實(shí)體。 云芝浸膏(Coriolus versicolor extract, CVE)由本 實(shí)驗(yàn)室提取完成,提取過程為將 700.0 g 云芝清洗干 凈,加入 12 倍量的蒸餾水,蒸煮 3.0 h;第 2 次再加入 10 倍量蒸餾水,繼續(xù)蒸煮 3.0 h。所得浸膏即為試驗(yàn)所 需藥物,試驗(yàn)時(shí),用生理鹽水將其稀釋為所需濃度。
1.3 儀器與設(shè)備
TGL-16 K 型離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)廠);HH-4 型恒溫水浴鍋(常州澳華儀器公司);FA 1004 B 型電 子天平、YP 5002 型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限 公司);BioTek-Epoch 型酶標(biāo)儀(美國(guó) BioTek 公司); SK 5200 H型超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);LEICA EG 1150 H 型包埋機(jī)、LEICA RM 2255 型 切片機(jī)(德國(guó)徠卡公司);KD-T 型攤片機(jī)(浙江省科迪 儀器設(shè)備有限公司);Coyote-Bio G 200 型組織勻漿破 碎儀(卡尤迪生物科技);OLYMPUS BX 53 型光學(xué)顯 微鏡〔奧林巴斯(中國(guó))有限公司〕。
2 方法
保持動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度為 25 ± 2 ℃,自由飲食。隔 日稱重,根據(jù)體重調(diào)整給藥量,劑量為10 mL(/ kg·d), 周期 30 d,末次給藥后,禁食不禁水 16 h。陰性對(duì)照組 灌胃花生油,其余各組均灌胃 1% CCl4 花生油溶液建 立肝損傷模型,劑量為 5 mL/kg,2 h 后解剖。摘眼 球取血待測(cè)血清相關(guān)指標(biāo);脫頸處死,取肝左葉,固定, 待做病理學(xué)研究,取肝右葉置于液氮內(nèi),待測(cè)肝組織相 關(guān)指標(biāo)。
3 討論與結(jié)論
通過觀察肝組織病理切片可得模型組肝細(xì)胞出現(xiàn) 大量溶解、脫落現(xiàn)象,而研究結(jié)果表明,CVE 能改善 CCl4 造成的肝細(xì)胞脫落、溶解,以及脂肪變性,這與孫卉等開展的云芝多糖保肝效果所得結(jié)論一致。在 前期開展云芝提取物對(duì)小鼠酒精肝損傷的保護(hù)作用研 究中發(fā)現(xiàn)CVE能明顯改善肝功能及病理病變。
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